摘要:氮素是導致水體污染的一類重要污染物。目前，由氮素污染引起的水體富營養(yǎng)化已成為世界性的環(huán)境問題。國內(nèi)外對氮素污染的治理日益重視，生物脫氮技術因其迅速安全倍受青睞，反硝化細菌是生物脫氮技術關鍵載體之一，本課題就反硝化細菌的選育優(yōu)化做了如下研究：

1、采用稀釋平板涂布分離法從采集的土壤中篩選出3株反硝化細菌，通過16S rDNA鑒定出兩株，分別為鮑曼氏不動桿菌（Acinetobacter baumannii），黃色海假單胞菌（Pseudomonas xanthomarina）。

2、以脫氮率為考核指標，比較3株細菌的反硝化能力，以鮑曼氏不動桿菌最佳，脫氮率達到78.5%。

3、以鮑曼氏不動桿菌為研究對象進行發(fā)酵條件的初步優(yōu)化。通過單因素實驗確定菌株生長最佳pH為5.0，最佳溫度為30℃；經(jīng)8因素2水平的PB實驗，確定碳源丁二酸鈉和氮源酵母粉是影響菌株生長的關鍵因素；進一步通過單因素實驗逐一優(yōu)化碳氮源最佳濃度，得最適發(fā)酵培養(yǎng)基為丁二酸鈉8 g/L、酵母粉6 g/L、硝酸鈉0.67 g/L、磷酸二氫鉀1.36 g/L、硫酸銨0.24 g/L、硫酸鎂0.2 g/L，培養(yǎng)條件為：pH 5.0，30℃，200 rpm。

4、最適培養(yǎng)條件下，鮑曼氏不動桿菌發(fā)酵液OD600達7.29，約3×108 cfu/ml，較優(yōu)化前提高了217%，發(fā)酵周期為14h，72 h去氮率達92.5%。 

關鍵詞：反硝化細菌；篩選鑒定；發(fā)酵優(yōu)化

目錄

摘要

ABSTRACT

第1章 緒論-1

1.1 水資源危機—氮素污染-1

1.1.1 氮素污染及其危害-1

1.1.2 生物脫氮治理氮素污染-2

1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及應用前景-2

1.2.1反硝化細菌及其作用機理-2

1.2.2 反硝化細菌的選育研究-3

1.2.3 反硝化細菌應用前景-3

1.3 本課題立題依據(jù)及內(nèi)容-4

第2章 材料與方法-5

2.1實驗材料-5

2.1.1土壤來源-5

2.1.2 主要儀器-5

2.1.3 主要試劑與工具酶-5

2.1.4 培養(yǎng)基-6

2.2實驗方法-6

2.2.1 菌株的篩選與鑒定-6

2.2.2脫氮能力測定-9

2.2.3 菌株發(fā)酵條件優(yōu)化-12

第3章 結果與討論-13

3.1菌株篩選及鑒定-13

3.1.1反硝化細菌篩選及初步鑒定-13

3.1.2形態(tài)學觀察及16S rDNA鑒定-13

3.1.3 反硝化能力測定-16

3.2 發(fā)酵條件優(yōu)化-16

3.2.1菌株生長曲線測定-16

3.2.2 初始pH對菌株生長的影響-17

3.2.3 溫度對菌株生長的影響-17

3.2.4 培養(yǎng)基關鍵成分分析實驗-18

3.2.5 碳氮源添加量對菌株生長的影響-19

3.2.6 優(yōu)化后菌株生長曲線與去氮能力-20

第4章結論與展望-23

4.1結論-23

4.2 不足之處及未來展望-23

參考文獻-25

致  謝-26