摘要:隨著第三產業的迅速發展，我國的餐飲業規模日益擴大，餐飲廢水中排出的廢油脂日益增多，不僅堵塞管網、嚴重污染城市環境，甚至滋生出了廢油脂的非法回收提煉，有毒“地溝油”回流市場用于食品加工等現象。這種被稱作“地溝油”的三無產品，其主要成分仍然是甘油三脂，卻又比真正的食用油多了許多致病、致癌的毒性物質。因此尋求一種成本低、效率高、對人和環境影響小的治理方法迫在眉睫。

在各種治理方法中，生物修復技術因為其治理成本低，降解效率高，并且不會引入二次污染等優點被認為是最具潛力和最有應用前景的油脂類污染修復手段。本課題致力于油污染環境的治理，以得到可高效降解油脂的菌株為目的，在污染環境中篩選目標微生物群，得到菌株后，對其進行鑒定及性能研究。

本課題的主要研究內容如下：

1以食用油作為微生物生長的唯一碳源，從自然界被食用油脂類污染過的土壤中經過富集、分離、馴化，篩選出5株具有食用油降解能力的菌株。選取其中生長速率較快，食用油生物降解率較高的一株菌A繼續研究。

2通過形態觀察、生理生化試驗對菌株A進行了初步鑒定，然后對其進行16s rDNA序列分析，將其鑒定并命名為短小芽孢桿菌A（Bacillus pumilius A）。

3通過單因素試驗考察了培養時間，初始食用油濃度，接種量及不同的培養條件下，菌株A對食用油的降解率的影響，確定了有較高食用油降解率的最適初始食用油含量為14 μL/mL、接種量為8%、溫度為27℃、pH 為7.5、搖瓶轉速180 r/min、培養時間為5d。根據單因素試驗結果，選取對食用油降解率影響較大的因素：初始食用油濃度、溫度、pH值、搖瓶轉速進行正交試驗，得到最優的條件為：初始食用油含量為14 μL/mL、溫度27℃、pH8.0、搖瓶轉速180 r/min，在此條件下，食用油降解率為68.12%。

關鍵詞：食用油；篩選鑒定；正交實驗；降解率；短小芽孢桿菌A

目錄

摘要

ABSTRACT

 第一章 緒論-1

1.1 地溝油的危害-1

1.1.1地溝油對土壤的污染-1

1.1.2地溝油對人體的危害-1

1.1.3地溝油油類污染的治理-2

  1.1.4生物修復-2

 1.1.4.1 微生物處理油脂的機理-2

 1.1.4.2影響生物修復的因素-3

1.2課題研究意義-4

1.3研究內容-5

第二章 材料與方法..7.

2.1實驗材料與培養基-7

2.1.1 實驗材料與試劑-7

2.1.2 分子生物學實驗相關材料-7

2.1.3實驗所用主要儀器-7

2.1.4 培養基-8

2.2培養方法-8

2.2.1 斜面培養-8

2.2.2 種子培養-8

2.2.3 搖瓶培養-8

2.3 菌種的篩選和鑒定-9

2.3.1 食用油降解菌的富集與馴化-9

2.3.2 菌種的篩選-9

2.3.3 菌種的生理生化實驗-9

2.3.4 菌種的分子生物學鑒定-10

2.3.5 16S rDNA的測序-11

2.4 食用油降解率的測定-11

2.4.1殘余食用油的萃取-11

2.4.2 殘余食用油的測定-11

2.4.3食用油降解率的計算方法-11

2.5 食用油降解條件的優化-11

2.5.1 初始食用油濃度對降解率的影響-12

2.5.2 培養時間對降解率的影響-12

2.5.3 培養溫度對降解率的影響-12

2.5.4 接種量對降解率的影響-12

2.5.5 初始pH對降解率的影響-12

2.5.6 搖瓶轉速對降解率的影響-12

2.5.7  正交實驗設計-12

第三章  結果與討論-13

3.1 菌種篩選-13

3.2 食用油降解菌株A鑒定-13

3.2.1菌種形態觀察和生理生化試驗-13

3.2.2分子鑒定-14

3.3搖瓶中種子的生長曲線-15

3.4 食用油的降解條件優化-16

3.4.1紫外分光光度計測定食用油濃度的標準曲線-16

3.4.2 初始食用油濃度對食用油降解率的影響-16

3.4.3 培養時間對食用油降解率的影響-17

3.4.4 培養溫度對食用油降解率的影響-17

3.4.5 接種量對食用油降解率的影響-18

3.4.6 初始pH對食用油降解率的影響-18

3.4.7 搖瓶轉速對食用油降解率的影響-19

3.4.8 各影響因素的正交實驗-20

第四章  主要結論與展望-23

4.1主要結論-23

4.2展望-23

參考文獻-25

致  謝-27