摘要:近年來，動物細胞培養已成為廣泛采用的技術手段，許多生物技術科學研究和產品的生產都離不開動物細胞的培養。由于傳統的含血清的細胞培養基會給生產和科研帶來諸多不利因素，無血清培養基的出現是培養基發展歷程上的一個里程碑。其一般是在合成培養基的基礎上，引入成分完全明確的或部分明確的血清替代成分，使培養基能滿足動物細胞培養的要求，又能有效的克服因使用血清所引發的問題。無血清培養基的顯著優勢使其在細胞培養領域得到重要的應用，并推動基因工程產品及其產業的發展。

本課題采用無錫博慧斯生物科技公司研發的無血清培養基進行細胞的馴化，目前已經使用CHO-CDM培養基成功馴化CHO-S細胞。馴化后的細胞均為懸浮生長體系，比生長速率，活細胞率和細胞密度與有血清培養過程相當。由于CHO細胞在無血清培養過程中會出現輕微的結團現象，采用靜置和搖床對比實驗，尋找到適宜的培養條件。以pCI為出發載體，在NotI和EcoRI之間插入VEGF165融合蛋白的片段，構建了pCI-HSA-VEGF165質粒。馴化好的細胞采用電穿孔和脂質體轉染的方法轉染質粒，采用Western Blot檢測蛋白表達情況。本課題目的旨在為開發和建立無血清懸浮培養體系大規模生產蛋白奠定基礎。

關鍵詞：無血清；哺乳動物細胞 ；轉染；蛋白表達

目錄

摘要

ABSTRACT

第1章 緒論

1.1 無血清培養基的介紹

1.2 無血清培養基的優勢

1.3 無血清培養基的應用

1.4 哺乳動物表達系統

1.5 國內外研究現狀及存在主要問題

1.6 立項背景與意義

1.7 應用前景

1.8 主要研究內容

第2章  實驗材料與方法

2.1 實驗材料

2.1.1 無血清培養基

2.1.2 細胞株

2.1.3 主要儀器設備

2.1.4 主要試劑

2.1.5 主要試劑配制

2.1.6 培養基的配制

2.2 主要實驗方法原理介紹

2.2.1 細胞轉染

2.2.2 WB原理

2.3 實驗方法

2.3.1 CHO-S、MDCK細胞馴化

2.3.2 CHO-S、CHO-DG44-22培養條件的優化

2.3.3 表達載體的構建

2.3.4 細胞轉染

2.3.5 蛋白檢測

第3章  實驗結果與分析

3.1 CHO-S、MDCK細胞馴化

3. 1.1 CHO-S細胞的馴化

3. 1.2 MDCK細胞的馴化

3. 2 CHO-DG44-22、CHO-S培養條件的優化

3. 2.1 CHO-DG44-22細胞搖床培養與靜置培養的對比實驗

3. 2.2 CHO-S細胞搖床培養與靜置培養的對比實驗

3.3 表達載體的構建

3. 4 細胞轉染

3.4.1 脂質體轉染

3.4.2 電穿孔

3.5 蛋白檢測

第4章 結論與展望

4.1 結論

4.2 不足之處及未來展望

參考文獻

致謝