摘要:本研究采用多酶分步復合水解方式制備黑豆抗氧化活性肽，并用大孔吸附樹脂和Sephadex G-15對其進行了分離純化。

利用Alcalase蛋白酶，Neutrase蛋白酶，F(xiàn)lavourzyme蛋白酶依次水解黑豆蛋白30 min、60 min、30 min，獲得的黑豆蛋白酶解產(chǎn)物對DPPH自由基的清除率為50.44%。

采用DA201-C大孔吸附樹脂進行吸附，并用不同濃度的乙醇進行梯度洗脫，試驗結(jié)果表明：25%乙醇洗脫組分肽得率最高，為35.67%；100%乙醇洗脫得到的黑豆肽組分對DPPH自由基的清除率最高，為64.52%，其平均疏水值為5.36 KJ/mol。

采用凝膠過濾層析對100%乙醇洗脫得到的肽組分進行分離純化，試驗結(jié)果表明：用蒸餾水洗脫效果較好，得到P1、P2和P3三個組分，其中P1和P2為肽類物質(zhì)，P3為氨基酸，組分P2具有最強的抗氧化活性，其對DPPH自由基的清除率為69.37%，平均疏水值為5.96 KJ/mol。

關鍵詞 黑豆肽；分離純化；抗氧化活性

目錄

摘要

Abstract

1 緒論-1

1.1 黑豆概述-1

1.2大豆蛋白酶解產(chǎn)物的國內(nèi)外研究概況-1

1.3大豆肽抗氧化的研究進展-2

1.3.1人體內(nèi)自由基過高的危害-2

1.3.2抗氧化劑的研究進展-2

1.3.3抗氧化活性肽的作用-2

1.4大豆肽分離純化技術研究進展-2

1.4.1微濾-3

1.4.2超濾-3

1.4.3離子交換色譜[18]-3

1.4.4大孔吸附樹脂[20，21]-3

1.4.5凝膠層析法[22，23]-4

1.5研究的目的及意義-4

2 材料與方法-5

2.1 實驗材料與儀器-5

2.1.1實驗材料-5

2.1.2 主要實驗儀器-5

2.2 實驗方法-6

2.2.1黑豆蛋白的制備-6

2.2.2蛋白質(zhì)含量的測定-6

2.2.3黑豆蛋白的酶解工藝-7

2.2.4黑豆蛋白酶解物水解度的測定-7

2.2.5黑豆蛋白酶解物抗氧化活性的測定(DPPH法—清除DPPH·自由基)-8

2.2.6 DA201-C大孔吸附樹脂分離黑豆肽-8

2.2.7黑豆蛋白酶解物的凝膠層析分離-9

3結(jié)果與分析-10

3.1黑豆蛋白質(zhì)含量測定結(jié)果-10

3.1.1蛋白質(zhì)含量標準曲線的制作-10

3.1.2 黑豆蛋白質(zhì)含量計算-10

3.2 黑豆蛋白水解產(chǎn)物的水解度和抗氧化活性的結(jié)果-10

3.3 DA201-C大孔吸附樹脂分離黑豆肽及洗脫各組分肽得率和抗氧化活性-10

3.4凝膠層析對黑豆肽的分離效果-11

3.4.1不同洗脫液對黑豆抗氧化活性肽的分離效果-11

3.4.2 G-15層析分離不同組分抗氧化活性比較-13

3.5 黑豆抗氧化肽組分的氨基酸組成分析-14

結(jié) 論-16

致謝-17

參考文獻-18