摘要:本論文通過從土壤中分離菌落，土壤稀釋法獲得單菌落，再通過鑒別培養基，根據透明水解圈大小，判斷產酶情況，獲得產酶較高菌株NP28和SP1。通過PCR方法獲得序列，送到上海生工生物公司測序，將序列進行拼接，獲得全序列，對菌株進行初步分類。將菌株的16S rDNA序列提交到美國國立生物信息中心（NCBI），菌株登錄號分別是NP28（FJ527481）和SP1（FJ908094）。分析其16S rDNA序列的同源性，對菌株進行鑒定，確定NP28是Klebsiella sp.，SP1是 Enterobacteriaceae sp.。

關鍵詞: 酸性蛋白酶；細菌；16S rDNA；Klebsiella；Enterobacteriaceae

目錄

摘要

Abstract

1  緒論-1

 1.1 酸性蛋白酶的研究和應用-1

  1.1.1酸性蛋白酶的理化性質及分離方法-1

  1.1.2 酸性蛋白酶的酶學性質-1

  1.1.3 酸性蛋白酶的作用機理-2

  1.1.4 酸性蛋白酶的應用-2

 1.2 酸性蛋白酶的應用前景-4

2 實驗材料和方法-5

 2.1 實驗材料-5

2.1.1 菌株-5

2.1.2 藥品-5

2.1.3主要儀器設備-6

 2.2 實驗方法-6

2.2.1 培養基的配制-6

2.2.1.1 LB固體培養基配制-6

2.2.1.2 配制方法注意事項-7

2.2.2 高壓滅菌及操作臺的消毒-7

2.2.2.1 儀器介紹-7

2.2.2.2 滅菌步驟-7

2.2.3.1 菌株的保藏-8

2.2.3.2 菌種的活化-8

2.2.4 透明圈法篩選-9

2.2.4.1 透明圈的原理-9

2.2.4.2 實驗注意要點-9

2.2.4.3 實驗具體操作步驟-9

2.2.5 進行PCR擴增16SrDNA-9

2.2.6 利用16S rDNA序列進行鑒定-10

3 結果與討論-12

 3.1 實驗結果-12

3.1.1 篩選到耐酸性產蛋白酶活性較高菌株-12

3.1.2 16S rDNA序列的測定和分類分析-13

 3.2 討論-14

3.2.1 基因組DNA的提取-14

3.2.2 產酶菌株的分析-14

結論-16

致謝-17

參考文獻-18