摘要:論文篩選產低溫纖維素酶菌株，并進行鑒定和初步發酵條件的分析。采集農田土壤和農產品果實表皮，通過培養和剛果紅平板法篩選分離產纖維素酶菌株。利用16SrDNA 通用引物對菌株基因組DNA 進行擴增，分析16S rDNA序列的同源性，對菌株進行鑒定。采用DNS 法測定所產纖維素酶酶活。結果顯示，分離得到一株產低溫纖維素降解細菌T34，初步鑒定其芽胞桿菌Bacillus。該菌在20℃培養48h時酶活達到最大值，為1.43U/mL•mim。

關鍵詞：細菌；纖維素酶；低溫；篩選

目錄

摘要

Abstract

1緒論-2

1.1 纖維素酶-2

1.1.1 纖維素酶組成及來源-2

1.1.2 纖維素酶的作用機理-2

1.1.3 纖維素酶的應用-3

1.2 本研究的意義-5

2 實驗材料和方法-6

2.1 試驗材料-6

2.1.1 菌株的來源-6

2.1.2 主要化學試劑及藥品-6

2.1.3 主要儀器設備-6

2.1.4 培養基的配置-7

2.1.5 高壓滅菌-7

2.2 菌株篩選方法-8

2.2.1 菌株初步篩選-8

2.2.2 產纖維素酶菌株的篩選-8

2.2.3 菌株保藏-9

2.3 菌種的鑒定-9

2.3.1 生長曲線的制作-9

2.3.2 菌株基因組DNA的提取-9

2.3.3 16SrDNA序列分析-10

2.4纖維素酶特性-10

2.4.1 羧甲基纖維素鈉 (CMC-Na) 法-10

2.4.2 葡萄糖標準曲線的繪制-11

2.4.3 發酵時間對纖維素酶的發酵影響測定-11

2.4.4 溫度對纖維素酶的發酵影響測定-12

2.4.5 金屬離子對纖維素酶活的影響測定-12

3 實驗結果和結論-13

3.1 篩選到產低溫纖維素酶菌株-13

3.2 菌株T34生長狀況分析-13

3.3 基因組DNA提取結果-14

3.4 16SrDNA擴增結果-14

3.5 16SrDNA測序分析-14

3.6 T34產纖維素酶分析-15

3.6.1 葡萄糖標準曲線的繪制-15

3.6.2 發酵時間分析-15

3.6.3 發酵溫度分析-16

3.6.4 金屬離子對纖維素酶活的影響測定-16

結論-17

致謝-18

參考文獻-19