摘要:目的 優化測序反應體系，尋求測序反應體系中引物的最佳使用量。方法 本實驗選取不同引物量設計單因素水平試驗進行研究，將BigDye使用量固定為2μL、模板使用量固定為2μL，引物量選取體積1μL、3μL、5μL，濃度1p、3.2p、10p進行DNA測序反應。結果 以平均信號強度、連續讀取長度和QV20+為評判標準得出引物的最佳使用量。結論 在DNA模板純度相對較好的情況下，測序反應體系中引物的最佳使用量為濃度：3.2p，體積：1μL

關鍵詞：DNA測序  測序引物  單因素實驗

Abstract:　Purpose To optimize the sequencing reaction system and seek the best usage sequencing primers in the reaction system.Methods This experiment takes different amount of primers designed to study the level of single factor experiment.To fix BigDye usage is 2μL, template fixed usage is 2μL, amount of primers selected volume 1μL , 3μL, 5μL, concentration1 p , 3.2 p, 10 p for DNA sequencing reaction. Results At an average signal strength, continuous read length and QV20 + to judge standards obtain the best use of the primer. Conclusion Under the condition of relatively good purity of DNA template,the best usage in the sequencing primer reaction system is concentration: 3.2 p, volume: 1μL     

Key Words：DNA sequencing  sequencing primers  single factor experiment

　　　DNA測序技術是分子生物學研究中最常用的技術，它的出現極大地推動了生物學的發展，廣泛應用于分子生物學的研究[1]。傳統的化學降解法、雙脫氧鏈終止法以及在它們的基礎上發展來的各種DNA測序技術統稱為第一代DNA測序技術。第一代測序技術在分子生物學研究中發揮過重要的作用，如人類基因組計劃(human genome project，HGP)主要基于第一代DNA測序技術[2]。1975年Sanger和Coulson發明了“加減法”測定DNA序列。1977年在引入雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)后，形成了雙脫氧鏈終止法，使得DNA序列測定的效率和準確性大大提高[3] 。目前Sanger的雙脫氧鏈終止法仍被廣泛地應用。隨著DNA測序技術的不斷改進和儀器自動化程度的不斷提高，使得DNA自動測序儀操作簡化、靈敏度提高，對各種模板均能得到較好的測序結果[4]