摘要:在這個農業發展較快的中國，農藥生產也在不斷的進步。在日常生活過程中，農藥正在被大量使用，尤其是在那些以林業和牧業為主的地區，農藥的使用更加頻繁。因此，農藥所產生的危害也越來越普遍，在人類生活的各個方面都有農藥的殘留，嚴重地影響到了環境的純凈度。在所有農藥中，有機磷農藥的危害比其他農藥要大得多。目前，我們面臨的問題就是如何降解有機磷農藥，減少有機磷對環境、對生物造成的破壞。本文研究的是構建一種可以有效降解有機磷農藥的新型工程菌，將opd基因從黃桿菌里提取出來，通過擴增、與表達載體pGS-21a連接轉化等技術，將其轉化到大腸桿菌BL21的過程，使這種工程菌能更好的處理農藥所造成的嚴重危害。

關鍵詞 opd；降解；克隆；轉化

目錄

摘要

Abstract

1 緒論-1

1.1 農藥的概況-1

1.1.1農藥及有機磷農藥簡介-1

1.1.2 農藥的污染及危害-1

1.2 農藥的降解方法-2

1.2.1 物理降解-2

1.2.2 化學降解-3

1.2.3 生物降解-3

1.3 有機磷農藥的發展趨勢-4

1.4 工程菌存在的問題和展望-5

1.4.1構建工程菌存在問題-5

1.4.2對工程菌的展望-5

1.5 本論文研究目的及意義-5

2 實驗試劑、儀器、材料及方法-7

2.1 實驗試劑與儀器-7

2.2 實驗材料-8

2.2.1 實驗菌株和質粒-8

2.2.2培養基配方-8

2.2.3 主要化學試劑的配制-8

2.3 實驗方法-9

2.3.1 黃桿菌的活化及保存-9

2.3.2 opd基因的擴增-9

2.3.3 克隆載體的構建-10

2.3.4 表達載體的構建-12

2.3.5 重組表達子的篩選-13

2.4 酶活測定-13

3 結果與分析-15

3.1 opd基因的擴增-15

3.2 opd基因與克隆載體連接-16

3.3 opd基因與表達載體連接-17

3.3.1 表達載體pGS-21a-17

3.3.2 opd基因與pGS-21a連接后的電泳驗證-18

3.4 酶活的測定-18

結論-20

致謝-21

參考文獻-22