摘要:采用樹(shù)脂固定酶法，從7 種離子交換樹(shù)脂和吸附樹(shù)脂中，篩選出固定化效果較好的大孔強(qiáng)堿苯乙烯系陰離子交換樹(shù)脂D202-Ⅱ?yàn)檩d體，以戊二醛為交聯(lián)劑，通過(guò)先吸附后交聯(lián)的方法對(duì) D-阿洛酮糖3-差向異構(gòu)酶的固定化進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)以固定化酶的相對(duì)酶活和相對(duì)酶活回收率作為衡量指標(biāo)，得到了最佳的固定化條件，并且對(duì)固定化和游離狀態(tài)下的D-阿洛酮糖3-差向異構(gòu)酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了比較。結(jié)果表明，最佳固定化酶條件為: 加酶量為 7.5 U/0.5g( 酶活單位/樹(shù)脂) ，吸附時(shí)間為4 h，吸附溫度為30 ℃，戊二醛濃度為0.05% ，交聯(lián)時(shí)間為4 h。固定化酶重復(fù)使用7次，酶活仍能穩(wěn)定保持在初始酶活的65%以上。

選取海藻酸鈉作為固定化細(xì)胞的載體，以戊二醛作為交聯(lián)劑，釆取包埋交聯(lián)法固定，得到最佳固定化細(xì)胞條件為：海藻酸鈉濃度為3%，細(xì)胞終濃度為60 g/L，CaCl2濃度為2%，固定化時(shí)間為4 h，戊二醛濃度為0.05% ，交聯(lián)時(shí)間為4 h，最適反應(yīng)溫度70 ℃，最適pH8.0。固定化酶重復(fù)使用8次，酶活仍能穩(wěn)定保持在初始酶活的45%以上，具有良好的操作穩(wěn)定性。

關(guān)鍵詞：D－阿洛酮糖3－差向異構(gòu)酶；海藻酸鈉；樹(shù)脂；固定化

目錄

摘要

ABSTRACT

第1章 緒論-1

1.1  D－阿洛酮糖簡(jiǎn)介-1

1.1.1  D-阿洛酮糖自然界分布和來(lái)源-1

1.1.2  D-阿洛酮糖的保健功能-2

1.1.3  D-阿洛酮糖在食品加工中的應(yīng)用-2

1.1.4  D-阿洛酮糖制備研究進(jìn)展-3

1.2  固定化技術(shù)簡(jiǎn)介-4

1.2.1  固定化酶的技術(shù)簡(jiǎn)介-4

1.2.2  酶的固定化方法-4

1.2.3  固定化細(xì)胞技術(shù)簡(jiǎn)介-5

1.2.4  固定化細(xì)胞的方法-6

1.3  D-阿洛酮糖3-差向異構(gòu)酶的固定化研究進(jìn)展-6

1.4 立題背景及意義-7

1.5 本課題的研究?jī)?nèi)容-7

第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法-9

2.1  材料與試劑-9

2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料-9

2.1.2 主要試劑-9

2.1.3 主要儀器-9

2.2 實(shí)驗(yàn)方法-9

2.2.1  DPE粗酶液的制備-9

2.2.2  DPE粗酶液的純化-9

2.2.3  Folin-酚法測(cè)定純化的重組蛋白濃度-10

2.2.4  DPEase的酶活測(cè)定-10

2.2.5  樹(shù)脂固定DPE酶的條件優(yōu)化-10

2.2.6  固定化DPE酶的酶學(xué)性質(zhì)及穩(wěn)定性研究-11

2.2.7 海藻酸鈉固定化DPE重組細(xì)胞的條件優(yōu)化-12

2.2.8 固定化細(xì)胞的酶學(xué)性質(zhì)及穩(wěn)定性研究-12

第3章 結(jié)果與分析-13

3.1  DPE酶的純化與濃度測(cè)定-13

3.2  樹(shù)脂固定化酶條件的優(yōu)化-14

3.2.1  樹(shù)脂載體的選擇-14

3.2.2 加酶量的優(yōu)化-14

3.2.3 吸附溫度的優(yōu)化-15

3.2.4 吸附時(shí)間的優(yōu)化-15

3.2.5 戊二醛濃度的優(yōu)化-16

3.2.6 戊二醛交聯(lián)時(shí)間的優(yōu)化-16

3.3  固定化DPE酶的酶學(xué)性質(zhì)及其穩(wěn)定性研究-17

3.3.1 最適溫度與溫度穩(wěn)定性-17

3.3.2 最適pH與pH穩(wěn)定性-18

3.3.3 固定化酶的操作穩(wěn)定性-19

3.4  固定化重組細(xì)胞的條件優(yōu)化-19

3.4.1  海藻酸鈉濃度對(duì)固定化的影響-19

3.4.2  細(xì)胞終濃度的優(yōu)化-20

3.4.3  CaCl2濃度的優(yōu)化-20

3.4.4  固定化時(shí)間的優(yōu)化-21

3.4.5  戊二醛濃度的優(yōu)化-21

3.4.6-戊二醛交聯(lián)時(shí)間的優(yōu)化-22

3.5  海藻酸鈉固定化細(xì)胞的酶學(xué)性質(zhì)與穩(wěn)定性研究-22

3.5.1  最適反應(yīng)溫度與溫度穩(wěn)定性-22

3.5.2 最適反應(yīng)pH及pH穩(wěn)定性-23

3.5.3  固定化細(xì)胞的操作穩(wěn)定性-24

第4章 結(jié)論與展望-25

4.1結(jié)論-25

4.2不足之處及未來(lái)展望-25

參考文獻(xiàn)-26

致  謝-29