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摘要:本實驗以食品生物工程實驗中心酶工程實驗室所保藏的黑曲霉菌株作為菌源,對黑曲霉所產的內切型菊粉酶的酶學性質進行了研究。 首先對20株黑曲霉菌株進行篩選,通過發酵培養測定酶活,最終篩選出一株酶活最高的菌株E133131號,其酶活為0.66U/mL。 對黑曲霉E133131號菌株所產菊粉酶進行了酶學性質的研究,得到以下結論:最適pH為4.5;最適溫度為60℃;最佳底物濃度為4mmol/L;米氏常數(Km)為1.434mmol/L;Ca2+對菊粉酶有激活作用,當加入濃度為1.5mmol/L的Ca2+時,使酶活從0.66U/mL提高到1.09U/mL,Mn2+、Cu2+和Mg2+對內切型菊粉酶有抑制作用,其中Cu2+的抑制作用最大,使酶活從0.66U/mL降低到0.095U/mL,Na+、 K+、 Zn2+、 Fe2+、 Mg2+對菊粉酶的酶活影響不大;pH在5.0~8.0范圍內,溫度在50~60℃之間菊粉酶活力較穩定。 關鍵詞 內切型菊粉酶;酶學性質;黑曲霉;底物濃度;米氏常數
目錄 摘要 Abstract 1 緒論-1 1.1 菊粉酶的簡介-1 1.1.1 菊粉酶的來源-1 1.1.2 菊粉酶的概念-1 1.1.3 菊粉酶的分類-1 1.1.4 菊粉酶的性質-1 1.1.5 菊粉酶的主要應用-2 1.2 本課題的主要內容及研究意義-3 2 實驗材料與方法-5 2.1 實驗材料-5 2.1.1 牛蒡-5 2.1.2 菌種-5 2.2 儀器與設備-5 2.3 主要試劑-5 2.4 培養基-7 2.4.1 初篩培養基-7 2.4.2 誘導培養基-7 2.4.3 發酵培養基-7 2.4.4 查氏培養基-7 2.5 實驗方法-8 2.5.1 牛蒡汁的制備-8 2.5.2 菊糖溶液的制備-8 2.5.3 葡萄糖標準曲線的建立-8 2.5.4 內切型菊粉酶酶活力測定方法-9 2.5.5 黑曲霉菌株的活化-9 2.5.6 菊粉酶粗酶液的制備-10 2.5.7菊粉酶酶活最高菌株的篩選-10 3 結果與分析-11 3.1 標準曲線的繪制-11 3.2 酶學性質的研究-11 3.2.1 pH值對菊粉酶活力的影響-11 3.2.2 溫度對菊粉酶活力的影響-12 3.1.3 反應時間對菊粉酶活力的影響-13 3.1.4 金屬離子對菊粉酶活力的影響-14 3.1.5 底物濃度對菊粉酶活力的影響-15 3.1.6 I/S值的測定-16 3.1.7 米氏常數Km和最大反應速度的測定-17 3.3 酶的穩定性的研究-19 3.3.1 pH值對菊粉酶穩定性的影響-19 3.3.2 溫度對菊粉酶穩定性的影響-19 結論-21 致謝-22 參考文獻-23 |