摘要：本文以一株菌株Pectobacterium sp.為菌種，以發酵產物中酸性蛋白酶酶活為指標，對產酸性蛋白酶的條件進行了優化，用正交實驗法確定各因素的最佳條件，從而確定最適的組合水平。結果表明，這個菌株在溫度40 ℃，pH 2.5 - 3.0的酸性介質中，培養64 h，產酸性蛋白酶能力最強。Fe2+、Mn2+ 和Cu2+ 離子對該酶具有激活作用，其中0.90 mg/mL濃度Fe2+ 激活作用最強，其相對酶活達到131.5％，而Ca2+和Ni2+離子對該酶活性具有抑制作用。

關鍵詞： Pectobacterium sp.；酸性蛋白酶；發酵條件優化；酶學性質

目錄

摘要

Abstract

1 緒論-1

1.1 酸性蛋白酶的研究背景和研究現狀-1

1.1.1 酸性蛋白酶研究背景-1

1.1.2 酸性蛋白酶研究現狀-1

1.2 酸性蛋白酶催化特性-2

1.2.1 酶的催化作用-2

1.2.2 酶的作用特點-3

1.3 酸性蛋白酶活性的影響條件-3

1.3.1 溫度對酸性蛋白酶活性的影響-4

1.3.2 pH對酸性蛋白酶酶活性影響-4

1.3.3 無機離子對酸性蛋白酶酶活性影響-4

1.4 提高酶產量的措施-5

1.4.1 添加誘導物-5

1.4.2 控制阻遏物濃度-5

1.4.3 表面活性劑-5

1.4.4 添加產酶促進劑-5

1.5 基因工程生產酸性蛋白酶-6

1.6 細菌在細胞內蛋白的降解途徑及其分子調節機制-6

1.6.1 自噬-6

1.6.2 泛素蛋白酶體系-6

1.7 酸性蛋白酶的應用-7

1.7.1 酸性蛋白酶在酒精濃醪發酵中的應用-7

1.7.2 酸性蛋白酶在飼料工業上的應用-7

1.7.3 酸性蛋白酶在羊毛紡織品上的應用-7

1.7.4 酸性蛋白酶在食品工業中應用-7

1.7.5 酸性蛋白酶在其他方面應用-8

1.8 酸性蛋白酶的研究前景-8

2 材料與方法-9

2.1 供試菌株-9

2.2 培養基-9

2.3 主要試劑名稱-9

2.4 主要儀器設備-10

2.5 實驗試劑的配置-10

2.5.1 0.4 mol/L 碳酸鈉溶液-10

2.5.2 0.4 mol/L 三氯乙酸溶液-10

2.5.3 10 g/L酪素溶夜-10

2.5.4 標準酪氨酸溶液-10

2.6 酸性蛋白酶發酵液中酶活的具體操作步驟-11

2.6.1 蛋白酶活力測定-11

2.6.2 標準曲線-11

2.6.3 不同的影響因子下的酶活測量-11

2.6.4 酶活力計算-12

3 結果與討論-13

3.1 結果分析-13

3.1.1 酪氨酸標準曲線的分析-13

3.1.2 不同的影響因子對酸性蛋白酶酶活力的影響-13

3.2 討論-18

結論-20

致謝-21

參考文獻-22