摘要：本論文對一株產堿性蛋白酶的芽孢桿菌進行了分子鑒定、發酵分析和酶活分析。利用PCR技術對該菌株16S rDNA序列進行擴增，獲得了1435 bp的序列，將其與NCBI Genbank相關數據進行比對，使用DNAMAN軟件分析相關序列，確定該菌株是一株芽孢桿菌。對該芽孢桿菌進行發酵培養，優化酶反應條件，分別在不同pH、溫度，添加不同金屬離子，對該菌株堿性蛋白酶酶活的影響進行分析。結果顯示，該菌在連續液體發酵48 h達到產酶高峰，pH11，反應溫度在40 ℃時酶活最高，達到41.23 U/mL。Cu2+對該菌株的蛋白酶活性有促進作用，Zn2+、Ca2+、Mn2+對酶活沒有明顯影響。

關鍵詞：堿性蛋白酶；發酵培養；芽孢桿菌；酶學分析

目錄

摘要

Abstract

1 緒論-1

1.1 微生物產酶的條件控制-1

1.2 蛋白酶的研究與應用-1

1.2.1 酶蛋白的分類-1

1.2.2 蛋白酶的專一性-1

1.2.3 微生物蛋白酶的酶系組成-1

1.2.4 主要蛋白酶及其性質-2

1.2.5 蛋白酶的應用-3

1.3 微生物產堿性蛋白酶的研究-4

1.3.1 堿性蛋白酶的簡介-4

1.3.2 堿性蛋白酶的研究進展-5

1.4 本研究的意義-6

2材料與方法-7

2.1 實驗材料-7

2.1.1菌株-7

2.1.2試劑配制-7

2.1.3主要儀器設備-8

2.2 培養基的配制-8

2.3 高壓滅菌及操作臺的消毒-8

2.4 菌株保藏-9

2.5 菌種的活化-9

2.6 福林試劑檢測堿性蛋白酶活性-9

2.7 堿性蛋白酶發酵液中酶活的測量方法-10

3 結果與討論-12

3.1 產酶菌株的16S rDNA序列-12

3.2 酶學性質研究-12

3.2.1 酶活定義-12

3.2.2 標準曲線的繪制-13

3.2.3 培養時間對產酶的影響-13

3.2.4 反應pH對酶活的影響-14

3.2.5 反應溫度對酶活的影響-14

3.2.6 金屬離子對酶活的影響-15

3.3討論-15

結論-17

致謝-18

參考文獻-19