摘要：瓊脂酶是一種多糖水解酶，來源比較廣泛，主要是來自微生物和一些軟體動物體內(nèi)。Groleau第一次從海水中分離得到瓊脂的分解細(xì)菌一瓊脂假單胞菌。按照其裂解糖苷鍵的不同，可以將瓊脂酶分為α-瓊脂酶和β-瓊脂酶這兩大類型。根據(jù)其裂解酶的底物專一性可以將瓊脂酶的作用機(jī)制分為兩種。到目前為止，只有極少數(shù)幾種瓊脂酶的基因得到了克隆與測序。瓊脂酶在多糖結(jié)構(gòu)的研究中、瓊脂寡糖的制備、分子生物學(xué)研究方面、海藻單細(xì)胞的制備、海藻酶解的工具酶及在藻類致病中具有重要的應(yīng)用價值，因此，對瓊脂酶的研究具有重要的理論意義和經(jīng)濟(jì)價值。

本研究采用了多種生理生化試驗和前期的16S rDNA來鑒定該菌種為革蘭氏陽性菌，是蠟樣芽孢桿菌。利用硫酸銨沉淀、透析、葡聚糖凝膠G-75柱層析、樹脂交換層析等分離純化技術(shù)對其發(fā)酵液中的酶蛋白進(jìn)行分離純化，再用蛋白質(zhì)電泳初步得出其分子量。

關(guān)鍵詞  瓊脂酶；鑒定；活性；分離純化

目錄

摘要

Abstract

1緒論-1

1.1瓊脂酶的研究概況-1

1.1.1 瓊脂-1

1.1.2 瓊脂酶的研究背景-1

1.1.3 瓊脂酶的來源-2

1.1.4 瓊脂酶的酶系-3

1.2 瓊脂酶的作用機(jī)制-3

1.3 瓊脂酶的分子生物學(xué)研究-4

1.4瓊脂酶的應(yīng)用研究-4

1.4.1在多糖結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用-4

1.4.2 用于瓊脂寡糖的制備-5

1.4.3 在分子生物學(xué)研究中的應(yīng)用-5

1.4.4在海藻單細(xì)胞制備中的應(yīng)用-5

1.4.5 用作海藻酶解的工具酶-5

1.4.6在藻類致病中的作用-6

1.5本課題的研究內(nèi)容-6

2材料與方法-7

2.1試驗材料-7

2.1.1樣品來源-7

2.1.2 培養(yǎng)基-7

2.1.3主要試劑-8

2.1.4主要儀器-8

2.2 實驗方法-9

2.2.1菌種的活化-9

2.2.2 產(chǎn)瓊脂酶菌株的生理生化鑒定-9

2.2.3 酶活的測定-10

2.2.4 產(chǎn)瓊脂酶菌株的分離純化-11

2.2.5 SDS-PAGE 純度鑒定-11

3 結(jié)果與分析-12

3.1 產(chǎn)瓊脂酶菌株生理生化鑒定結(jié)果分析-12

3.1.1 糖酵解試驗-12

3.1.2 淀粉水解試驗-12

3.1.3 甲基紅試驗-13

3.1.4 吲哚試驗-13

3.1.5 硝酸鹽試驗-14

3.1.6 明膠試驗-14

3.1.7 尿素酶試驗-15

3.1.8 硫化氫試驗-15

3.2酶活的測定-16

3.3 產(chǎn)瓊脂酶菌株的分離純化結(jié)果分析-16

3.3.1 Sephadex G-75分子篩凝膠過濾層析-16

3.3.2 陰離子交換層析-17

3.4 SDS-PAGE 純度鑒定結(jié)果分析-18

4 結(jié)論-19

致謝-20

參考文獻(xiàn)-21