摘要：本文對富鍺黑木耳對小鼠腸道菌群的影響進行了研究。前期進行富鍺黑木耳菌絲體的種子培養、發酵，獲得富鍺黑木耳菌絲體，后期通過設置4個對照組：空白組（正常喂食/10只）、對照組（喂0.9%NaCl生理鹽水溶液/10只）、實驗組（喂富鍺黑木耳菌絲體粉末溶液/5只）、急性毒理組（一次性喂大量富鍺菌絲體粉末溶液/5只）。進行15天的喂養，在第15天的時候收集各小組小鼠的糞便少許于EP管中，然后提取糞便中的大腸桿菌和乳酸桿菌的DNA并進行純化。最后對提取出來的腸道菌群的DNA進行熒光PCR，測定大腸桿菌和乳酸桿菌的數量。

實驗結果表明：喂富鍺黑木耳菌絲體的小鼠腸道內的大腸桿菌數量未見明顯變化，乳酸桿菌數量明顯增加，經口毒理性實驗表明大劑量的富鍺黑木耳對小鼠沒有特別影響, 富鍺黑木耳對小鼠沒有急性毒性。

富鍺黑木耳對腸道菌大腸桿菌無明顯的調節作用，對乳酸桿菌的生長有促進作用。

關鍵詞：鍺；黑木耳；腸道菌群；大腸桿菌；乳酸桿菌；16S rDNA；熒光定量PCR

目錄

摘要

Abstract

1 緒論-1

1.1 黑木耳的概述-1

1.2 黑木耳的營養成分-1

1.3 黑木耳的功能性成分及藥用價值研究-1

1.3.1 功能性成分-1

1.3.2 黑木耳的藥用價值-1

1.4 鍺的概述-2

1.5 食藥用真菌富集微量元素概述-4

1.5.1 食藥用真菌富集微量元素的機理-4

1.5.2 食藥用真菌作為微量元素載體的優點-4

1.6 本研究的立題依據及研究的目的和意義-4

2 材料與方法-6

2.1 供試菌種-6

2.2 主要試劑-6

2.3 主要設備-7

2.4 培養基及培養條件-7

2.5 實驗方法-7

2.5.1 黑木耳菌種的活化-7

2.5.2 黑木耳富鍺培養-8

2.5.3 培養條件的優化-9

2.5.4 菌絲體的收集-9

2.5.5 生物量的測定方法-9

2.5.6 黑木耳菌體中鍺的含量測定-9

2.5.7 小鼠的喂養與分組實驗-11

2.5.8 小鼠腸道菌群樣品的收集-11

2.5.9 統計學分析-11

3 結果與分析-12

3.1 小鼠糞便樣品中菌群的DNA提取和純化-12

3.1.1  DNA 的提取-12

3.1.2  DNA 的純化-12

3.2  DNA標準品的制備-12

3.3 熒光定量 PCR 反應-12

3.3.1 引物的設計-12

3.3.2 引物特異性-13

3.4 標準曲線的制作-13

3.4.1大腸桿菌的標準曲線-14

3.4.2 乳酸桿菌的標準曲線-14

3.5 小鼠腸道菌群樣品16S rDNA定量分析-14

3.6 富鍺黑木耳對小鼠腸道大腸桿菌及乳酸桿菌的影響-15

3.7 經口毒理性實驗-15

結論-16

致謝-17

參考文獻-18

附錄-20