摘要：漆酶是一種含多個銅原子的多酚氧化酶，能催化氧化多種芳香族化合物，在木質素礦化降解、腐殖質形成等過程中發揮重要作用。其應用主要集中在以下幾方面:參與有機合成，生物檢測，有毒化合物的消除，工業廢水處理，紙漿的生物漂白等。

本實驗從徐州工程學院周圍土壤中篩選到一株高產漆酶的菌株，進一步對其進行了菌株的鑒定與生理生化的鑒定研究。

通過對其生理生化性質研究表明該菌株的菌體具有運動性，且需氧；接觸酶實驗表明該菌是革蘭氏陽性菌，能產生過氧化氫酶；明膠液化實驗表明，該菌能產生明膠酶，將明膠分解成氨基酸；檸檬酸鹽實驗表明該菌能利用檸檬酸鹽作為碳源；在L-精氨酸利用與L-半胱氨酸實驗中，該菌都能利用唯一碳源在培養基上生長，且明顯超過基礎培養基；甲基紅實驗表明該菌能分解葡萄糖產生大量酸性產物，使甲基紅指示劑變紅，顯陽性；酪素水解實驗表明該菌能分解酪素而使菌落周圍呈現透明；Tween80降解實驗、0.1%剛果紅耐受實驗結果也是陽性。

最后對其進行16S rDNA鑒定，最終確定了該菌株為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。

關鍵詞：漆酶；篩選；鑒定；生理生化性質；枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)

目錄

摘要

Abstract

1 緒論-1

1.1 漆酶的研究現狀-1

1.1.1 漆酶的化學組成-1

1.1.2 漆酶的氧化特性-1

1.2 漆酶的研究進展-1

1.3 漆酶的現實應用-2

1.3.1 在食品工業中的應用-2

1.3.2 在造紙工業中的應用-2

1.3.3 在環境保護中的應用-3

1.3.4 在合成方面的應用-3

1.3.5 智能包裝指示劑及生物檢測-4

1.3.6 在生物肥料中的應用-4

1.3.7 在醫藥衛生中的應用-4

1.4 漆酶的研究意義-4

2 材料與方法-6

2.1 儀器與試劑-6

2.1.1 主要試劑-6

2.1.2 主要儀器-6

2.2 菌株的分離篩選-7

2.2.1 土壤樣品采集-7

2.2.2 菌株的篩選-7

2.2.2.1 菌落的初篩-7

2.2.2.2 菌落的復篩-7

2.2.2.3 菌種保存-7

2.2.3 培養基的制備-7

2.3 菌種的鑒定-8

2.3.1 形態學、生理生化特征測定-8

2.3.1.1運動性-8

2.3.1.2需氧性-8

2.3.1.3 接觸酶試驗-8

2.3.1.4 明膠液化試驗-9

2.3.1.5 檸檬酸鹽利用-9

2.3.1.6 L-精氨酸利用-9

2.3.1.7 L-半胱氨酸的利用-9

2.3.1.8 甲基紅試驗-9

2.3.1.9 酪素水解試驗-9

2.3.1.10 Tween 80降解試驗-9

2.3.1.11 0.1%剛果紅耐受試驗-9

2.3.2 分子生物學方法鑒定-9

2.3.2.1 提取基因組-10

2.3.2.2 提取基因組結果檢測-10

2.3.2.3 16S rDNA的擴增-10

2.3.2.4 PCR結果的檢測-11

2.3.2.5 PCR產物的回收-11

2.3.2.6 16S rDNA測序-12

3 結果與討論-13

3.1 菌株的篩選-13

3.2 生理生化特征-13

3.2.1 運動性-13

3.2.2 需氧性-13

3.2.3 接觸酶實驗-14

3.2.4 明膠液化試驗-14

3.2.5 檸檬酸鹽利用-14

3.2.6 L-精氨酸利用-15

3.2.7 L-半胱氨酸利用-15

3.2.8 甲基紅實驗-16

3.2.9 酪素水解-16

3.2.10  Tween 80降解實驗-17

3.2.11 0.1 %剛果紅耐受試驗-17

3.2.12 小結-18

3.3  菌種鑒定-18

3.3.1菌株DNA提取-18

3.3.2 16S rDNA測序結果-19

結論-21

致謝-22

參考文獻-23

附錄-25