摘要：本課題以食品生物工程實驗中心酶工程實驗室保藏的黑曲霉菌株為出發菌株，經過液體深層發酵生產高效內切型菊粉酶。以牛蒡為唯一碳源，從20株黑曲霉菌株中篩選出菊粉酶酶活最高的菌株，為編號08013的菌株，酶活為2.03U/mL。

用紫外線、氯化鋰和甲基磺酸乙酯依次對出發菌株進行誘變，根據誘變劑量的變化，來提高黑曲霉菌株的誘變率，從而進行菊粉酶高酶活黑曲霉菌株的篩選。

實驗結果表明：對08013菌株進行紫外線誘變，紫外線最佳誘變劑量是30min，致死率為59.34%，在此條件下誘變出發菌株（08013），根據菌落直徑與透明圈大小篩選出20株菌落較大的獨立菌落進行純培養，經酶活測定，編號為08-ZL-010菌株酶活最高，為2.27 U/mL,比出發菌株的酶活提高了10.7%。對08-ZL-010進行氯化鋰誘變，氯化鋰的最佳誘變劑量是0.90%，致死率為77.38%，選育出編號為08-LL-003的菌株酶活酶活最高，為2.62 U/mL，比08-ZL-010菌株的酶活提高了15.4%。對08-LL-003菌株進行甲基磺酸乙酯誘變，甲基磺酸乙酯(EMS)的最佳誘變劑量是0.60 mol/L，致死率為77%，在此條件下，以08-LL-003菌株為出發菌株進行誘變，選育出編號為08-JL-010菌株酶活最高，即2.83 U/mL。以08013菌株為出發菌株，經過紫外線、氯化鋰和甲基磺酸乙酯三種誘變劑量的誘變，最終選育出一株酶活最高的菌株08-JL-013，其酶活是2.83U/mL，比出發菌株08013的酶活（2.03 U/mL）提高了39.4%。

對08-JL-013號菌株進行遺傳穩定性實驗，經過五代穩定性實驗，菌株的酶活指標均在2.78 U/mL 到2.83 U/mL之間，說明該菌株具有較穩定的遺傳性狀。

關鍵詞 內切型菊粉酶；黑曲霉；紫外線；氯化鋰；甲基磺酸乙酯(EMS)；誘變

目錄

摘要

Abstract

1 緒論-1

1.1 菊粉簡介-1

1.2 菊粉酶簡介-1

1.2.1菊粉酶概念-1

1.2.2 菊粉酶分類-1

1.2.3 菊粉酶性質-1

1.2.4 菊粉酶來源-1

1.2.5 菊粉酶應用-2

1.3 誘變育種-3

1.3.1 誘變育種方法的簡介-3

1.3.2誘變劑的種類-3

1.3.3 誘變育種操作流程-3

1.4 本實驗研究的內容與意義-4

1.4.1 研究內容-4

1.4.2 研究的意義-4

2 材料與方法-5

2.1實驗材料與試劑-5

2.1.1實驗材料-5

2.1.2試劑-5

2.2實驗設備與儀器-6

2.3 實驗方法-6

2.3.1牛蒡汁的制備-6

2.3.2 培養基與化學試劑的制備-7

2.3.3標準曲線的建立-8

2.3.4 菊粉酶酶活的測定-9

2.3.5 黑曲霉菌種的活化與篩選-9

2.3.6 黑曲霉生產菊粉酶的最佳培養時間的確定-10

2.3.7 黑曲霉單孢子懸液的制備-10

2.3.8 黑曲霉細胞的誘變-10

2.3.9 孢子突變率的計算-10

2.3.10 穩定性實驗-11

2.3.11 菌種的保藏-11

3 結果與分析-12

3.1 標準曲線的繪制-12

3.2 酶活的測定-13

3.3 菌種的篩選-13

3.4 菊粉酶最佳生產時間的確定-14

3.5 單孢子懸液濃度的確定-15

3.6 誘變劑最佳條件的確定-16

3.6.1 紫外線最佳誘變劑量的確定-16

3.6.2 氯化鋰最佳誘變劑量的確定-18

3.6.3 甲基磺酸乙酯最佳誘變劑量的確定-20

3.7 遺傳穩定性實驗-22

結論-23

致謝-24

參考文獻-25